T—钙粘蛋白与恶性黑色素瘤的相关性研究
一、立题依据（科学意义及国内外现状分析及参考文献）
恶性黑素瘤是一种对放、化疗不敏感的肿瘤，其发病率在全球范围内呈增高趋势。人们一直在期待着可以征服恶性黑素瘤的新疗法的出现。最近大量的数据表明恶性肿瘤的发展与T—钙粘蛋白的表达变化相关。T—钙粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、卵巢癌等多种恶性肿瘤中被检测到表达减少。最近的研究表明，T/H—钙粘蛋白在乳腺癌中的重新表达能抑制肿瘤细胞的生长，降低体外培养的肿瘤细胞的侵袭潜能。T/H—钙粘蛋白这个新型钙粘蛋白分子在人类许多癌细胞中表达都降低，表明它或许在肿瘤细胞的侵袭和转移及维持正常细胞的表型中起重要作用。T/H—钙粘蛋白与肿瘤的发生、发展有着密切的联系，也许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机。然而，T—钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用，目前还没有相关研究的报道。因此，本实验将进行相关方面的探讨性研究。
参考文献：
Toyooka, K.O., Toyooka, S., Virmani, A.K., Sathyanarayana, U.G., et al. Cancer Res 20xx Jun 1;61(11):4556-60.
Lee, S.W., 1996. Nat. Med., 2:776-782.
Zhong, Y., Y. Delgado, J. Gomez, S.W. Lee et al. 20xx Clin Cancer Res.
Takeuchi, M., Misaki, A., Chen, B.K., et al. (1999) Histopathology, 35, 87-8.
二、研究内容及预期成果
研究内容：
第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T—cadherin表达情况。
第二部分：T—cadherin基因克隆和真核表达载体的构建。
第三部分：T—cadherin基因的真核表达及生物活性分析。
拟解决的关键问题：通过RT—PCR反应扩增出T—cadherin的基因全长。
预期成果及提供形式：观察T—钙粘蛋白在正常皮肤组织细胞、痣细胞及黑色素瘤细胞中的表达情况，进一步阐明T—钙粘蛋白作用机制。T—钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活性的抑制情况，探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其它肿瘤的方法。
三、研究方案
研究方法：
第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T—cadherin表达情况。采用免疫组织化学和免疫细胞化学方法。
第二部分：T—cadherin基因克隆和真核表达载体的构建。
第三部分：T—钙粘蛋白基因的真核表达及生物活性分析。采用Western印迹法检测转染后蛋白的表达，流式细胞周期分析，凋亡的检测等方法。
技术路线图：
研究进度安排：
20xx年9月——20xx年7月：学习学位课程，查阅文献，完成课题设计。
20xx年9月——20xx年9月：基本完成实验研究工作。
20xx年10月——20xx年3月：完成实验补遗工作并进行统计分析，撰写论文。
20xx年4月——20xx年6月：论文答辩。
四、经费预算
试剂费用：15000元
组织及细胞：1000元
文献资料费：500元
论文打印费：1000元
五、实验条件
实验在导师的指导下进行，导师XXX教授、主任医师对黑色素瘤的诊断治疗、检测方法和研究进展有深入的了解，对本课题的研究设计及实验有重要的指导意义。已完成黑色素瘤及T—钙粘蛋白研究最新进展的文献检索和综述报告工作。所有实验均在XX医学院附属医院皮肤病研究室和中心实验室完成。实验室的老师实验技术熟练，在细胞培养、免疫组化及分子生物学等方面都可给予指导；实验所需的科研仪器设备实验室均具备。
请注意，这只是一个范例，具体的开题报告应根据实际的研究项目、目标、方法和预期结果等进行详细撰写。在撰写开题报告时，务必确保所有信息的准确性和完整性，并遵循所在学术机构或期刊的格式和要求。
